大家好,今天来为大家解答培养基的制备这个问题的一些问题点,包括培养基的配制方法也一样很多人还不知道,因此呢,今天就来为大家分析分析,现在让我们一起来看看吧!如果解决了您的问题,还望您关注下本站哦,谢谢~
配制培养基的步骤
向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化。并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。
用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12~15毫升。每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。
分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。
培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。
(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5~1米左右的木条,厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上,使管内培养基自然倾斜,凝固后即成斜面培养基。
(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培养皿盖,右手迅速将培养基倒入培养皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度。
铺放培养基后放置15分钟左右,待培养基凝固后,再5个培养皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培养基未长杂菌,即可用来培养微生物。
参考资料来源:百度百科—培养基
培养基的制备基本方法
培养基各成分完全溶解后,应进行pH的初步调正,因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化,例如,牛肉浸液约可降低pH0.2。而肠浸液pH却会有显著的升高。因此,对这个步骤,操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH,保证培养基的质量。pH调正后,还应将培养基煮沸数分钟,以利培养基沉淀物的析出。
如何配置培养基
培养基是细胞或微生物生长所需的营养物质的混合物。培养基的配置需要注意以下几个方面:
1.成分:培养基的成分必须满足细胞或微生物所需的营养物质。通常包括碳源、氮源、矿物质、维生素、生长因子和缓冲液等组分。
2. pH值:培养基的pH值必须控制在适宜的范围内,以维持细胞或微生物的生长和代谢。不同的细胞或微生物对pH值的要求不同,通常需要对不同的培养基进行pH值调整。
3.温度:培养基的配制和保存需要在适宜的温度下进行,以保持培养基的稳定性和活性。
4.稳定性:培养基必须具有稳定性,能够长期保存而不失效。为了保持培养基的稳定性,可以将其分装并保存在低温干燥的环境中。
1.酵母提取物(Yeast Extract):5 g/L
2.胰蛋白胨(Tryptone):10 g/L
3.氯化钠(Sodium Chloride):10 g/L
以上三种成分的比例和浓度可以根据需要进行微调,以满足不同菌株的生长需求。
除了以上三种主要成分外,LB培养基还可以添加其他成分,如葡萄糖、琼脂、磷酸盐缓冲液等,以满足不同菌株的生长需求。例如,葡萄糖可以提供碳源,促进细菌生长和繁殖;琼脂可以使液态培养基凝固成固态培养基,方便菌落计数和分离;磷酸盐缓冲液可以调节pH值,维持培养基的稳定性。
1.准备试剂和仪器:准备培养基所需的试剂和仪器,保证其干燥和无菌。
2.称量试剂:按照配方要求,依次称取所需试剂,并将其分别加入蒸馏水中。
3.混合均匀:用磁力搅拌器将培养基混合均匀,直到试剂完全溶解。
4.调节pH值:用pH计测量培养基的pH值,如有需要,可添加适量的酸碱溶液调节pH值。
5.灭菌:将培养基倒入适当的培养瓶中,用高压蒸汽灭菌器对培养基进行灭菌处理。
6.储存:将灭菌后的培养基保存在低温干燥的环境中,避免受潮和污染。
1.培养基的pH值必须控制在适宜的范围内,以维持细胞或微生物的生长和代谢。
2.使用培养基之前,必须进行灭菌处理,以避免培养基被细菌或真菌污染。
3.培养基的配制和使用应该严格遵守操作规程,以避免误操作和交叉污染。
4.培养基的储存和保存应该在低温干燥的环境中进行,避免受潮和污染。
培养基是细胞或微生物生长所需的营养物质的混合物,其成分、pH值、温度和稳定性等方面都需要注意。常用的LB培养基的配方包括酵母提取物、胰蛋白胨和氯化钠,配制步骤包括称量试剂、混合均匀、调节pH值、灭菌和储存等。在使用培养基时,必须注意操作规程,以避免误操作和交叉污染。
怎样自制培养基
自制培养基方法很多,根据材料,可以有针对性得去选择:
( 1) PDA基本培养基:马铃薯200克、琼脂20克、葡萄糖20克、水1,000毫升、pH值自然。
(2)PDA综合培养基:马铃薯200克、琼脂20克、葡萄糖20克、蛋白胨5克、磷酸二
氢钾3克、硫酸镁1.5克,维生素B12―4斤、水1,000毫升,pH自然。
这两种培养基制备首先将马铃署去皮,洗净,切成小块,放入锅中加水1,000毫升煮沸20分钟,然后用纱布过滤取其汁液,将其它称好的原料连同研碎的维生素B1放入滤液中,用清水补足1,000毫升,然后加热使其溶化,用玻璃棒将培养基搅均,然后分装试管。
(3)棉籽皮综合培养基:棉籽皮200克、麸皮50克、琼脂20克、葡萄糖20克、蛋白胨3克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1.5克、维生素B12-4片,水1,000毫升、pH值自然。
(4)木屑、麸皮培养基:木屑(阔叶树)100克,麸皮50克、蛋白胨5克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁2克、琼脂20克、葡萄糖20克、水1,000毫升、pH值自然。
(5)麸皮培养基:麸皮100克,琼脂20克,葡萄糖20克,蛋白胨3克,磷酸二氢钾3克,硫酸镁2克、水1,000毫升,pH值自然。
以上三种培养基的制备方法基本相同,首先将棉子皮,木屑或麸皮放入锅中,加水1,000毫升水,加热煮沸30分钟,然后用四层纱布过滤,取出过滤液,加入其它原料,补足1,000毫升液体,再加热使各材料溶化后即可。
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